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我們在運用ELISA試劑盒96孔板的實驗測定的時分，常發現有“邊緣效應"，也即是外周孔顯色較基地孔深。經研討證真實溫育中的熱力學梯度或許是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導體，在實驗室的慣例ELISA測定中，將板從室溫（一般在25℃擺布）置于37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與基地孔之間或許存在一熱力學梯度。因此運用水浴或在將反應溶液參與至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地掃除“邊緣效應"，而且可進步測定的重復性。 
ELISA試劑盒即是在實驗中，一定有運用微量加樣器參與樣本的過程。提示留心：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺起和發作氣泡,ELISA試劑盒太快的話無法確保微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區，易致使非特異吸附,濺起會對鄰近孔發作污染,呈現氣泡則反應液界面有差異,所以，有時分一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，一般即是上述加樣及試劑的過錯所形成的。