競(jìng)爭(zhēng)法ELISA試劑盒(也稱(chēng)抑制或封閉法ELISA通過(guò)定量某種樣品分析物對(duì)預(yù)計(jì)信號(hào)的干擾，來(lái)測(cè)定該分析物在樣品中的含量，可通過(guò)以下方式進(jìn)行：微孔板用一種分析物或一種對(duì)靶標(biāo)分析物具有特異性的抗體包被(即直接法和間接法)，再添加一種有部分某種檢測(cè)的靶標(biāo)分析物，以競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體上的位點(diǎn)。信號(hào)與分析物含量呈負(fù)相關(guān)，因此，如果靶標(biāo)分析物的濃度較分析物高，靶標(biāo)分析物競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合標(biāo)記抗體，參考信號(hào)將會(huì)較靶標(biāo)分析物的濃度較低的情況增強(qiáng)。
競(jìng)爭(zhēng)法的理論基礎(chǔ)是抗體，只有在抗體基礎(chǔ)上，兩種抗原才會(huì)形成競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。該方法一般用來(lái)檢測(cè)具有較少表位的小分子物質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)概要
以直接競(jìng)爭(zhēng)法ELISA試劑為例，將特異性抗體吸附于固相載體，加入待測(cè)抗原(標(biāo)準(zhǔn)品或樣本)標(biāo)記的檢測(cè)抗原，二者競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合，然后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)溫育和洗滌后加入顯色底物。顯色的深淺與樣品中待測(cè)物質(zhì)含量呈負(fù)相關(guān)。
準(zhǔn)備所有的試劑和梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品。板條加入洗液靜置浸泡30 秒。
標(biāo)準(zhǔn)品孔加入2倍倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品；非特異性結(jié)合(NSB)和大結(jié)合(B0)孔加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或培養(yǎng)基。
血清/血漿：樣本孔加入樣本；細(xì)胞培養(yǎng)上清：樣本孔加入細(xì)胞培養(yǎng)上清。
除了Blank和非特異性結(jié)合(TA)孔空白，NSB孔加入1×檢測(cè)緩沖液，其余每孔加入稀釋的偶聯(lián)物。
封膜，室溫孵育1小時(shí)，洗滌6次。
除了TA和Blank孔，其余每孔加入稀釋的HRP標(biāo)記的鏈霉親和素。
封膜，室溫孵育30分鐘，洗滌6次。
TA孔加入稀釋的HRP標(biāo)記的鏈霉親和素。
每孔加入顯色底物,避光,室溫孵育5 - 30分鐘。
每孔加入終止液,30分鐘內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)檢測(cè)OD值，參考波長(zhǎng)570nm或630nm。
注：以上步驟是以上海晶抗生物ELISA試劑盒為參考，不同廠(chǎng)家的試劑盒操作步驟可能不一樣，開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前一定要仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)哦~
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