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了解這些ELISA實驗細節(jié),何愁實驗不成功
更新時間:2018-09-25   點擊次數:1122次

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◆注意事項:
1、標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會發(fā)作假陽性反響。保存過久可發(fā)作聚合在ELISA中可使本底加深。
2、凍結標本溶解后,蛋白質部分濃縮,分布不均,應充沛混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛混合,不要在混勻器上激烈震動。
3、污濁或有沉積的標本應先離心或過濾,弄清后再檢測。
4、重復凍融會使蛋白效價降低,所以代測樣本如需保存作屢次檢測,宜少數分裝冰存。

◆ELISA需要遵從的幾個細節(jié)關鍵:
1.抗原或抗體能吸附于固相載體外表,并堅持其免疫學活性;
2.抗原或抗體可通過共價鍵與酶銜接構成酶結合物,而此種酶結合物仍能堅持其免疫學和酶學活性;
3.酶結合物與相應抗原或抗體結合后,可根據參加底物的色彩反響來斷定是否有免疫反響的存在,并且色彩反響的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的,可根據已知濃度的抗原或抗體的色彩反響的深淺繪制規(guī)范曲線并依此計算出不知道樣品中抗體或抗原的濃度。
除了以上內容,在ELISA試劑盒細節(jié)中,稀釋前、后的樣品有必要充沛混勻,一切試劑在加樣前也須搖勻,以確保試驗的均一性。

 

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